• 从PCR产物到涂板只需40分钟
• 即用型Ligation Master Mix
• 高特异性UA杂交，用于高效克隆
• 试剂盒提供感受态细胞
• 转化细胞可立刻涂板

QIAGEN PCR Cloning^plus Kit提供即用型连接反应，包括3’端含有U突出末端的线性克隆载体，3’端带有A突出末端的PCR产物可直接进行高效、快速的连接和克隆。QIAGEN PCR Cloning^plus Kit还提供E. coli感受态细胞和SOC培养基，用于高效转化。

原理

pDrive Cloning Vector（参见pDrive Cloning Vector）通过UA杂交可对PCR产物进行高效克隆。载体是3’端带有U突出末端的线性形式，能与Taq和 其他非高保真DNA聚合酶产生的带有A突出末端的PCR产物进行高特异性杂交。pDrive Cloning Vector具有很多有用的特征，便于对克隆的PCR产物进行分析。这些特征包括多种独特的限制性酶切识别位点、通用测序引物位点和用于体外转录的启动 子。此外，载体还可进行氨苄青霉素和卡那霉素筛选，以及对重组克隆的蓝/白斑筛选。

PCR产物可高效克隆到pDrive Cloning Vector，与基于TA的克隆载体相比，所需时间更少。而且，T是最可能与非互补碱基（如G、C和T）杂交的碱基，带有T突出末端的载体更可能发生自连 或连接克隆引物或退火引物，导致假阳性克隆数目增加。相比起来，pDrive Cloning Vector具有更高克隆效率，表明U对非特异性碱基配对有更低容忍度。

Ligation Master Mix采用预混形式，专用于为高效克隆提供最佳的杂交环境。

使用QIAGEN EZ Competent Cells能让克隆步骤更加快速和方便。转化的细胞通常都需要在SOC培养基中孵育复苏，需要时间来表达抗性。与此不同，QIAGEN EZ Competent Cells不需要这个耗时的复苏孵育步骤即可高效转化（每微克DNA >10⁸个菌落形成单位（CFU）。

QIAGEN PCR Cloning^plus Kit的组成

成分	包括	浓度
pDrive Cloning Vector		50 ng/µl
Ligation Master Mix		2x solution
Distilled Water		–
QIAGEN EZ Component Cells		–
SOC medium		1x solution

操作流程

直接将PCR产物和pDrive Cloning Vector及Ligation Master Mix简单混合，再将连接反应液加入到感受态细胞中进行转化。QIAGEN EZ Competent Cells在转化后无需在SOC培养基复苏孵育，可直接在琼脂/氨苄青霉素培养基上涂板。

与拓扑异构酶法、TA法、常规粘性末端和平末端克隆方法相比，QIAGEN PCR Cloning^plus Kit（参见PCR Cloning Kit procedure）操作流程更加快速。连接需要30分钟，使用QIAGEN EZ Competent Cells进行转化和涂板只需10分钟，从PCR产物到涂板的整个操作流程只需40分钟。

应用

QIAGEN PCR Cloning^plus Kit适用于克隆任何3’端带有单独A突出末端的PCR产物。使用Taq和 其他非高保真DNA聚合酶产生的PCR产物无需任何制备，可直接进行克隆。提供高保真DNA聚合酶的试剂盒，如HotStar HiFidelity Polymerase Kit和QIAGEN LongRange PCR Kit，可产生带有A突出末端的PCR产物，非常适合与QIAGEN PCR Cloning^plus Kit配合使用。