Anstart RT-PCR Mix(Two Step)

品牌：Jinpan

Anstart RT-PCR Mix(Two Step)

MSDS

质检证书(CoA)

相似产品

货号 (SKU)	包装规格	是否现货	价格	数量
A292559-50T	50T	期货

产品名称	Anstart RT-PCR Mix(Two Step)
英文名称	Anstart RT-PCR Mix(Two Step)
运输条件	超低温冰袋运输

产品说明

Anstart RT-PCR Mix 试剂盒专为检测 mRNA 而设计的高灵敏度两步法 RT-PCR 试剂盒。本试剂盒提供的试剂能从微量的 mRNA 或总 RNA 中高效合成出cDNA 第一链，第一链合成采用 Super MMLV Reverse Transcriptase，它能非常有效地以 RNA 为模板，在 Oligo(dT) primer, Random Primers 或其它特定的引物与 RNA 退火后，从引物的 3’-末端合成与 RNA 互补的 DNA（cDNA 第一链）。本试剂盒中 PCR 扩增试剂，采用了最适合于荧光定量PCR 的热启动酶（Anstart Taq DNA Polymerase）具有高扩增效率和高特异性，能进行稳定的实时荧光定量 PCR。

产品内容

Super MMLV Reverse Transcriptase（200U/μl）

5×One Step RT-PCR Buffer

Solution I（10×）

Rnasin（40U/μl）

Anstart Taq DNA Polymerase（5U/μl）

5×Taq Buffer

dNTP Mix（25mM）

使用方法

1. 第一链合成

体系 1：

试剂	体积	终浓度
Primer-R（10p）	1μl	1p
dNTP Mix（25mM）	0.4μl	1mM
RNA（0.5ug）	—	—
超纯水	Up to 10μl	—
总体积	10μl	—

反应条件：65℃，5min 后迅速冰上放置至少 1min

体系 2：

试剂	体积	终浓度
5×HS HiTaq One-Step RT-PCR buffer	4μl	1p
Solution I（10×）	2μl	1mM
Super MMLV Reverse Transcriptase	1μl	10U/μl
RNasin（40U/μl）	1μl	2U/μl
超纯水	Up to 10μl	—
总体积	10μl	—

将体系 2 加入到反应后的体系 1 中，进行第一链合成；

反应条件：37℃，60min；85℃，10min；

85℃保温 10min  后冰上冷却，得到的 cDNA  溶液可直接用于 2nd-Strand  cDNA  的合成或者PCR 扩增等，PCR  扩增时 cDNA  溶液的使用量建议使用 10 -15μl。 2.PCR 扩增

体系 3：

试剂	体积	终浓度
5×Taq Buffer	10μl	1×
dNTP Mix（25mM）	0.4μl	0.2mM
Primer-probe Mix	3 μl ※	—
Anstart Taq DNA Polymerase	0.5μl	—
cDNA	15μl※	—
超纯水	Up to50μl	—
总体积	50μl	—

※模板、引物用量根据实验室具体情况调整。

反应条件：95℃，2.5min；

其余反应条件可根据引物和模板的具体情况自行调整。

Product manual

Anstart RT-PCR Mix Kit is a high-sensitivity two-step RT-PCR kit designed specifically for the detection of mRNA. The reagents provided in this kit can efficiently synthesize the first strand of cDNA from a small amount of mRNA or total RNA. Super MMLV Reverse Transcriptase is used for the synthesis of the first strand, which can effectively use RNA as a template. In Oligo(dT) primer, After Random Primers or other specific primers anneal to RNA, DNA complementary to RNA (cDNA first strand) is synthesized from the 3′-end of the primer. The PCR amplification reagents in this kit use Anstart Taq DNA Polymerase, which is most suitable for fluorescent quantitative PCR, which has high amplification efficiency and high specificity, and can perform stable real-time fluorescent quantitative PCR.

Product content

Super MMLV Reverse Transcriptase（200U/μl）

5×One Step RT-PCR Buffer

Solution I（10×）

Rnasin（40U/μl）

Anstart Taq DNA Polymerase（5U/μl）

5×Taq Buffer

dNTP Mix（25mM）

Instructions

First-strand synthesis

System 1:

Reagent	Volume	Final concentration
Primer-R（10p）	1μl	1p
dNTP Mix（25mM）	0.4μl	1mM
RNA（0.5ug）	—	—
Ultra-pure water	Up to 10μl	—
Total capacity	10μl	—

Reaction conditions: 65℃, after 5min, quickly place on ice for at least 1min

System 2:

Reagent	Volume	Final concentration
5×HS HiTaq One-Step RT-PCR buffer	4μl	1p
Solution I（10×）	2μl	1mM
Super MMLV Reverse Transcriptase	1μl	10U/μl
RNasin（40U/μl）	1μl	2U/μl
Ultra-pure water	Up to 10μl	—
Total capacity	10μl	—

Add system 2 to the reacted system 1 to perform the first-strand synthesis;

Reaction conditions: 37°C, 60min; 85°C, 10min;

Incubate at 85°C for 10 minutes and then cool on ice. The resulting cDNA solution can be directly used for 2nd-Strand cDNA synthesis or PCR amplification. The recommended amount of cDNA solution for PCR amplification is 10-15μl.

2. PCR amplification

Reagent	Volume	Final concentration
5×Taq Buffer	10μl	1×
dNTP Mix（25mM）	0.4μl	0.2mM
Primer-probe Mix	3 μl ※	—
Anstart Taq DNA Polymerase	0.5μl	—
cDNA	15μl※	—
Ultra-pure water	Up to50μl	—
Total capacity	50μl	—

System 3:

※The dosage of templates and primers is adjusted according to the specific conditions of the laboratory.

Reaction conditions: 95°C, 2.5min;

The remaining reaction conditions can be adjusted according to the specific conditions of the primers and templates.

储存温度	-20°C储存
品牌	Jinpan