• 在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上对基于HRM的基因分型进行成功评估
• 包括2种预先优化的HRM分析（IV类A/T SNP和缺失）
• 包括预混液、分析和模板DNA在内的全套试剂盒
• 采用全新的EvaGreen荧光染料，可生成独特的熔解曲线

Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit展示了Type-it HRM试剂的高性能，结合Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪先进的热学和光学特性，适用于基因突变和SNP检测。使用Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit，对利用Rotor-Gene技术的高分辨率熔解（HRM）分析的可靠性和重复性进行全面评估。

原理

高分辨率熔解（HRM）是PCR反应之后进行的闭管分析方法，它引起了极大的科学关注，适用于各种应用领域，如基因分型、表观遗传学和病原体分型。随着温 度的升高，双链DNA（dsDNA）解离为单链DNA（ssDNA），HRM根据双链PCR产物的解离（熔解）特性对其进行鉴别。根据序列、长度、GC含 量或链互补性对PCR产物进行鉴别，敏感度可低至单个碱基对改变。利用该方法，可以简单且直接地对此前未知的甚至是复杂的序列变异（如具有挑战性的基因分 型应用领域）进行检测和鉴别（参见Highly accurate genotyping by HRM analysis）。HRM较基于探针的基因分型分析更简单、更经济高效，且与传统的方法不同，它可以防止PCR反应后的残留污染。

使用Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪可轻松完成HRM，适用于：

• SNP基因分型
• 突变检测
• 病原体分型
• 甲基化分析

可实现HRM技术轻松评估的预设计分析

Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit可通过高分辨率熔解分析检测缺失或SNP。HRM技术利用PCR扩增后的熔解特性，实现DNA样本的快速鉴定。Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit结合性能出众的HRM PCR Master Mix，展示了Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪的热学和光学性能。除预混液和模板DNA外，试剂盒还提供了2种预先优化的HRM分析——IV类A/T SNP（参见Class IV SNP assay）和缺失分析（参见Deletion assay）。此外，使用QIAgility可实现快速、高精度的PCR设置的紧凑型台式仪器，无需手动移液步骤。

新型EvaGreen染料，可生成独特的熔解曲线

2x HRM PCR Master Mix中还包含EvaGreen，它是第三代饱和荧光染料，可选择性结合双链DNA。与传统的SYBR Green I不同，使用较高浓度的EvaGreen不会引起PCR抑制，其对富含GC和AT的区域具有同等结合亲和力，无明显的序列偏好。因此，EvaGreen尤 其适用于所有PCR产物类型的HRM分析，可观察到较小的荧光差异，生成独特的熔解曲线，从而确保获得标准化的结果。

预先优化的HRM PCR预混液

2x HRM PCR Master Mix包括HotStarTaq Plus DNA Polymerase和新型HRM PCR缓冲液体系。化学修饰的HotStarTaq Plus DNA Polymerase提供了严格的热启动特性，可以在室温下完成反应设置。HRM PCR Buffer的独特组分可确保极其严格且靶向的引物退火，从而实现了高特异性扩增。

操作流程

Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit可实现手动和自动反应设置。试剂盒手册提供了2种预先优化的实验方案，可实现便捷的反应设置，还提供了在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上进行HRM PCR的实验方案。手动反应设置实验方案包括两种分析的移液示意图。自动反应设置实验方案可采用QIAgility实现高精度的反应设置。HRM PCR实验方案中包括了预先优化的循环条件。

应用

使用Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit，轻松证明了Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪和Type-it HRM试剂在基于HRM的基因分型应用领域（如SNP或突变检测）的成功使用。