TAGZyme Kit
货 号：34300
产品规格：
原 产 地：德国
参考价格：7290 （参考价格，以实际价格为准）
优惠价格：
TAGZyme Kit
34300
去除蛋白的His标签，这些蛋白固有或含有可诱导DAPase终止位点
- 高特异性N端外切酶活性，避免内部切割
- 提供去除His标签的完整解决方案
- 在37°C，只需30分钟即可去除95%以上的标签
- 高纯度的最终产品
- 消减Ni-NTA色谱层析，去除所有污染物
TAGZyme Kit包含TAGZyme Enzymes、试剂和Ni-NTA Agarose，能高特异性、高效率地去除至多10 mg His-tagged蛋白的His标签。此试剂盒可用于去除蛋白的His标签，这些蛋白自身含有DAPase终止位点（使用TAGZyme pQE-2载体表达，使用TAGZyme DAPase Enzyme处理）或含有工程设计的谷氨酰胺终止位点（使用TAGZyme pQE-1载体表达，使用TAGZyme DAPase、Qcyclase和pGAPase Enzymes处理）。选择合适的载体，请联系QIAGEN技术专家或当地经销商。
His-tagged重组蛋白是研究蛋白结构和功能的重要工具。His标签很小并具有较低的免疫原性，使它通常不需要被去除。但是，不含有载体源氨基酸的蛋白产物更适用于一些应用，例如通过X射线或NMR进行结构研究，或生产具有治疗效果的药物。
TAGZyme体系从融合蛋白上去除N端的His标签，具有很高的特异性和效率。DAPase酶用于切割纯化的His-tagged蛋白N端的肽（参见His-tag removal。 当酶切割到“终止位点”时，消化就会停止，终止位点是一个不能作为底物的氨基酸基序（见表“DAPase 终止位点”）。如果重组蛋白自身不含有固有DAPase终止位点，可通过在载体上插入谷氨酰胺密码子来引入。在表达的蛋白中，谷氨酰胺变成焦谷氨酸，成为 DAPase的终止位点。
| 氨基酸 | DAPase终止位点 (↓) 序列* |
|---|---|
| 赖氨酸(Lys, K) | Xaa-Xaa…Xaa-Xaa ↓ Lys-Xaa… |
| 精氨酸(Arg, R) | Xaa-Xaa…Xaa-Xaa ↓ Arg-Xaa… |
| 脯氨酸(Pro, P) | Xaa-Xaa…Xaa-Xaa ↓ Xaa-Xaa-Pro-Xaa… |
| 脯氨酸(Pro, P) | Xaa-Xaa…Xaa-Xaa ↓ Xaa-Pro-Xaa-Xaa… |
| 谷氨酰胺(Gln, Q)† | Xaa-Xaa…Xaa-Xaa ↓ Gln-Xaa… |
| 异亮氨酸(Ile, I) | Xaa-Xaa…Xaa-Xaa ↓ Xaa-Ile-Xaa-Xaa… |
使用TAGZyme pQE-2载体表达自身含有终止位点的重组蛋白，不管DNA片段插入位点如何，都可完全、有效地去除N端His标签。使用DAPase酶孵育后，反应混合物加入到Ni-NTA基质中进行消减固定金属亲和层析色谱（IMAC)（参见Purification of detagged proteins）。His标签片段和TAGZyme DAPase Enzyme（C-端带有未切割的His标签）与基质结合，在穿透液中可回收到纯化的、不带标签的目的蛋白。
当蛋白自身不含有DAPase终止位点时，可通过表达载体插入谷氨酰胺密码子，从而向蛋白序列中引入终止位点。TAGZyme pQE-1载体可在His标签序列和蛋白序列之间编码一个谷氨酰胺残基，可配合TAGZyme体系发挥作用。谷氨酰胺残基位于His标签后的奇数位位点， 正好在原始蛋白第一个氨基酸之前。使用DAPase酶和过量的Qcyclase酶可去除His标签。通过DAPase酶去除His标签肽后，谷氨酰胺残基 暴露在N端反应液中过量的Qcyclase酶能将N端的谷氨酰胺残基催化形成焦谷氨酸。N端含有焦谷氨酸的肽不能作为DAPase的底物，进一步的切割就 被终止了。反应液进行一轮消减IMAC，His-tagged TAGZyme DAPase和Qcyclase Enzymes就能被去除。在穿透液中可收集到目的蛋白。目的蛋白N端的焦谷氨酸残基可被His-tagged pGAPase酶去除，pGAPase酶能被第二轮消减IMAC去除，在穿透液中即可获得纯化的、无标签的目的蛋白。
TAGZyme体系提供特异性切割、重组试剂的使用以及完全去除污染物，是获得不含His标签蛋白的理想选择，适合的应用包括：
- 通过NMR或X射线结晶确定蛋白结构
- 生产具有治疗功能的蛋白
产品详细信息
TAGZyme Kit
34300
去除蛋白的His标签，这些蛋白固有或含有可诱导DAPase终止位点
- 高特异性N端外切酶活性，避免内部切割
- 提供去除His标签的完整解决方案
- 在37°C，只需30分钟即可去除95%以上的标签
- 高纯度的最终产品
- 消减Ni-NTA色谱层析，去除所有污染物
TAGZyme Kit包含TAGZyme Enzymes、试剂和Ni-NTA Agarose，能高特异性、高效率地去除至多10 mg His-tagged蛋白的His标签。此试剂盒可用于去除蛋白的His标签，这些蛋白自身含有DAPase终止位点（使用TAGZyme pQE-2载体表达，使用TAGZyme DAPase Enzyme处理）或含有工程设计的谷氨酰胺终止位点（使用TAGZyme pQE-1载体表达，使用TAGZyme DAPase、Qcyclase和pGAPase Enzymes处理）。选择合适的载体，请联系QIAGEN技术专家或当地经销商。
His-tagged重组蛋白是研究蛋白结构和功能的重要工具。His标签很小并具有较低的免疫原性，使它通常不需要被去除。但是，不含有载体源氨基酸的蛋白产物更适用于一些应用，例如通过X射线或NMR进行结构研究，或生产具有治疗效果的药物。
TAGZyme体系从融合蛋白上去除N端的His标签，具有很高的特异性和效率。DAPase酶用于切割纯化的His-tagged蛋白N端的肽（参见His-tag removal。 当酶切割到“终止位点”时，消化就会停止，终止位点是一个不能作为底物的氨基酸基序（见表“DAPase 终止位点”）。如果重组蛋白自身不含有固有DAPase终止位点，可通过在载体上插入谷氨酰胺密码子来引入。在表达的蛋白中，谷氨酰胺变成焦谷氨酸，成为 DAPase的终止位点。
| 氨基酸 | DAPase终止位点 (↓) 序列* |
|---|---|
| 赖氨酸(Lys, K) | Xaa-Xaa…Xaa-Xaa ↓ Lys-Xaa… |
| 精氨酸(Arg, R) | Xaa-Xaa…Xaa-Xaa ↓ Arg-Xaa… |
| 脯氨酸(Pro, P) | Xaa-Xaa…Xaa-Xaa ↓ Xaa-Xaa-Pro-Xaa… |
| 脯氨酸(Pro, P) | Xaa-Xaa…Xaa-Xaa ↓ Xaa-Pro-Xaa-Xaa… |
| 谷氨酰胺(Gln, Q)† | Xaa-Xaa…Xaa-Xaa ↓ Gln-Xaa… |
| 异亮氨酸(Ile, I) | Xaa-Xaa…Xaa-Xaa ↓ Xaa-Ile-Xaa-Xaa… |
使用TAGZyme pQE-2载体表达自身含有终止位点的重组蛋白，不管DNA片段插入位点如何，都可完全、有效地去除N端His标签。使用DAPase酶孵育后，反应混合物加入到Ni-NTA基质中进行消减固定金属亲和层析色谱（IMAC)（参见Purification of detagged proteins）。His标签片段和TAGZyme DAPase Enzyme（C-端带有未切割的His标签）与基质结合，在穿透液中可回收到纯化的、不带标签的目的蛋白。
当蛋白自身不含有DAPase终止位点时，可通过表达载体插入谷氨酰胺密码子，从而向蛋白序列中引入终止位点。TAGZyme pQE-1载体可在His标签序列和蛋白序列之间编码一个谷氨酰胺残基，可配合TAGZyme体系发挥作用。谷氨酰胺残基位于His标签后的奇数位位点， 正好在原始蛋白第一个氨基酸之前。使用DAPase酶和过量的Qcyclase酶可去除His标签。通过DAPase酶去除His标签肽后，谷氨酰胺残基 暴露在N端反应液中过量的Qcyclase酶能将N端的谷氨酰胺残基催化形成焦谷氨酸。N端含有焦谷氨酸的肽不能作为DAPase的底物，进一步的切割就 被终止了。反应液进行一轮消减IMAC，His-tagged TAGZyme DAPase和Qcyclase Enzymes就能被去除。在穿透液中可收集到目的蛋白。目的蛋白N端的焦谷氨酸残基可被His-tagged pGAPase酶去除，pGAPase酶能被第二轮消减IMAC去除，在穿透液中即可获得纯化的、无标签的目的蛋白。
TAGZyme体系提供特异性切割、重组试剂的使用以及完全去除污染物，是获得不含His标签蛋白的理想选择，适合的应用包括：
- 通过NMR或X射线结晶确定蛋白结构
- 生产具有治疗功能的蛋白
