MRPL9 Antibody (N-term) 货号:AP13041a

MRPL9 Antibody (N-term) 货号:AP13041a

MRPL9 Antibody (N-term)

货  号:AP13041a

产品规格:100UL

原  产  地:USA

参考价格:1100 (参考价格,以实际价格为准)

优惠价格:

产品详细信息

MRPL9 Antibody (N-term) – Product info

Application WB, IHC
Primary Accession Q9BYD2
Other Accession Q2TBK2, NP_113608.1
Reactivity Human
Predicted Bovine
Isotype Rabbit Ig
Calculated MW 30243 Da

MRPL9 Antibody (N-term) – Additional info

Gene ID 65005
Other Names
MRPL9; 39S ribosomal protein L9, mitochondrial
Target/Specificity
This MRPL9 antibody is generated from rabbits immunized with a KLH conjugated synthetic peptide between 66-95 amino acids from the N-terminal region of human MRPL9.
Dilution
WB~~1:1000
IHC~~1:10~50

产品详细信息

MRPL9 Antibody (N-term) – Product info

Application WB, IHC
Primary Accession Q9BYD2
Other Accession Q2TBK2, NP_113608.1
Reactivity Human
Predicted Bovine
Isotype Rabbit Ig
Calculated MW 30243 Da

MRPL9 Antibody (N-term) – Additional info

Gene ID 65005
Other Names
MRPL9; 39S ribosomal protein L9, mitochondrial
Target/Specificity
This MRPL9 antibody is generated from rabbits immunized with a KLH conjugated synthetic peptide between 66-95 amino acids from the N-terminal region of human MRPL9.
Dilution
WB~~1:1000
IHC~~1:10~50

Type-it HRM PCR Kit (100) 货号:206542

Type-it HRM PCR Kit (100) 货号:206542

Type-it HRM PCR Kit (100)

货  号:206542

产品规格:100

原  产  地:德国

参考价格:1270 (参考价格,以实际价格为准)

优惠价格:

产品详细信息

Type-it HRM PCR Kit (100)

206542

应用高分辨率熔解(HRM)分析快速、准确的检测基因突变和SNPs

  • 准确、可靠的检测细微的序列变化
  • 非常适合用于具有HRM功能的PCR仪
  • 新型的EvaGreen荧光染料有助于获得清晰的熔解曲线
  • 便于开发新的可靠的HRM基因分型方案
  • 使用方便的预混液和经优化的操作流程

Type-it HRM PCR Kit提供可靠的解决方案,用于通过HRM分析进行快速、准确的基因分型。该试剂盒经优化,可成功分析难扩增的基因组位点。该试剂盒非常适合突变扫描,可 用于筛选样本的未知突变。可简便的建立新的HRM基因分型检测。该试剂盒可稳定的获得特异性的扩增产物,减少非特异性扩增,获得可靠结果,无需进行耗时的 PCR参数优化。这使得实验标准化、灵活,大大节省时间和成本。该试剂盒可配合多种具有HRM功能的real-time PCR仪使用,如Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪、Rotor-Gene 6000、LightCycler 480和Applied Biosystems 7500 Fast System。

原理

HRM是一种封闭管式的、PCR后的分析方法,引起了极大地科学兴趣。HRM可根据分离(熔解)行为对双链PCR产物进行描述,随着温度升高, 双链DNA(dsDNA)就会转变成单链DNA(ssDNA)。PCR产物可根据序列、长度、GC含量或链互补性,甚至是单个碱基变化进行区分。之前未知 的和复杂的序列变化被认为是具有挑战性的基因分型应用,现在都可轻松分析(参见Highly accurate genotyping)。与常规方法不同,HRM可避免PCR产物的残留污染,是一种更简单、更经济的基于探针的基因分型分析。

独特的试剂盒组成确保高度特异性的扩增(见表)。

新型的EvaGreen染料,用于不同的熔解曲线

Type-it HRM PCR Kit含有的EvaGreen是第三代饱和荧光染料,可选择性地结合到双链DNA上。与常规的SYBR® Green I相比,EvaGreen可使用更高浓度,无PCR抑制,对GC含量丰富和AT含量丰富的区域具有相同的结合能力,无明显的序列偏向性。这使得 EvaGreen非常适合对多种类型的PCR产物进行HRM分析,对更低的荧光差异产生不同的熔解曲线,确保获得标准化结果。

优化的HRM PCR Master Mix

HRM PCR Master Mix由HotStarTaq Plus DNA Polymerase和一种新型的HRM PCR缓冲液体系组成,能得到高度特异性的扩增和不同的熔解曲线,可用于难处理得基因组位点,如Class IV SNPs(参见Successful genotyping of an A/T Class IV SNP)。确保目的PCR产物的特异性扩增;减少非特异性产物和引物二聚体的形成,如果没有去除(参见Successful typing of gene mutations)。

新型的缓冲液(包含在预混液中)通过在每个PCR循环的退火步骤中提高特异性引物的结合比率来维持每个PCR循环的特异性扩增。KCl 和 (NH4)2SO4独特的平衡组合,使得该缓冲液在很宽的退火温度范围和Mg2+浓度范围内提供严格的引物退火条件。无需通过改变退火温度和Mg2+浓度来优化PCR反应。

适合难处理的突变位点

Type-it HRM PCR Kit是一种简单检测难处理突变位点的有力体系(参见Highly specific and successful amplification of difficult genomic loci)。 位于GC含量高或高级二级结构区域的突变或SNPs都难以扩增,用于常规的HRM PCR方法。2x HRM PCR Master Mix包含新型的PCR添加剂Q-Solution,使用特定浓度的Q-Solution可帮助克服这些困难。Q-Solution通过修饰DNA的熔解 行为,可成功扩增难处理的目标序列,无需优化。

Type-it HRM PCR Kit的特点
组成 优点
2x HRM PCR Master Mix 建立新的检测无需优化 
专门用于突变和SNPs的HRM分析
专门用于适合HRM分析的所有循环仪
方便的反应体系构建,减少移液误差
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 高度特异性扩增
室温下快速、简单的构建反应体系
Type-it HRM PCR Buffer 不同的熔解曲线
提高扩增特异性
Q-Solution 提高对难处理模板的扩增能力
EvaGreen Dye 新型的饱和dsDNA结合染料
不同的熔解曲线分析

操作流程

Type-it HRM PCR Kit包括专门的、应用特异性的操作流程,预优化后用于多种real-time循环仪,如Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪、Rotor-Gene 6000和LightCycler 480。此外,采用试剂盒提供的优化操作流程还可使用Applied Biosystems 7500 Fast System和Applied Biosystems 7900。我们的网站上提供详细的操作流程。

快速循环步骤,易构建的HRM检测,可直接获得结果

Type-it HRM PCR Buffer的独有特色和试剂盒提供的优化操作流程,确保一次获得成功的HRM基因分型结果。无需冗长的反应参数优化,新的HRM基因分型检测可快速、简单地标准化,并用于常规研究(参见Successful HRM analysis without the need for optimization)。此外,Type-it HRM PCR Kit的快速循环操作流程通过缩短PCR的运行时间提高通量,可更快获得准确的结果。

方便的试剂盒规格

该试剂盒采用即用型、预优化预混液的规格,更加方便。使用预混液可节约时间,简化反应体系构建的手工操作,通过排除移液误差和污染的可能来 源提高可重复性,尽量减少移液步骤,无需繁琐的计算。使用预混液可进行室温下的反应体系构建,快速、简单。预混液中含有的HotStarTaq Plus DNA Polymerase在95°C,5-minute被激活,可在热循环程序中简单设置。

应用

Type-it HRM PCR Kit可用于多种应用,包括:

  • 检测插入、缺失和异位 
  • 扫描基因突变
  • SNP基因分型
  • 检测和区分微生物突变体

Type-it HRM PCR Kit是多种研究领域的通用工具,包括:

  • 疾病和癌症基因位点的分型
  • 生物标记物的发现
  • 疾病相关研究
  • 转基因植物或动物的分型
  • 病原体检测和基因分型

产品详细信息

Type-it HRM PCR Kit (100)

206542

应用高分辨率熔解(HRM)分析快速、准确的检测基因突变和SNPs

  • 准确、可靠的检测细微的序列变化
  • 非常适合用于具有HRM功能的PCR仪
  • 新型的EvaGreen荧光染料有助于获得清晰的熔解曲线
  • 便于开发新的可靠的HRM基因分型方案
  • 使用方便的预混液和经优化的操作流程

Type-it HRM PCR Kit提供可靠的解决方案,用于通过HRM分析进行快速、准确的基因分型。该试剂盒经优化,可成功分析难扩增的基因组位点。该试剂盒非常适合突变扫描,可 用于筛选样本的未知突变。可简便的建立新的HRM基因分型检测。该试剂盒可稳定的获得特异性的扩增产物,减少非特异性扩增,获得可靠结果,无需进行耗时的 PCR参数优化。这使得实验标准化、灵活,大大节省时间和成本。该试剂盒可配合多种具有HRM功能的real-time PCR仪使用,如Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪、Rotor-Gene 6000、LightCycler 480和Applied Biosystems 7500 Fast System。

原理

HRM是一种封闭管式的、PCR后的分析方法,引起了极大地科学兴趣。HRM可根据分离(熔解)行为对双链PCR产物进行描述,随着温度升高, 双链DNA(dsDNA)就会转变成单链DNA(ssDNA)。PCR产物可根据序列、长度、GC含量或链互补性,甚至是单个碱基变化进行区分。之前未知 的和复杂的序列变化被认为是具有挑战性的基因分型应用,现在都可轻松分析(参见Highly accurate genotyping)。与常规方法不同,HRM可避免PCR产物的残留污染,是一种更简单、更经济的基于探针的基因分型分析。

独特的试剂盒组成确保高度特异性的扩增(见表)。

新型的EvaGreen染料,用于不同的熔解曲线

Type-it HRM PCR Kit含有的EvaGreen是第三代饱和荧光染料,可选择性地结合到双链DNA上。与常规的SYBR® Green I相比,EvaGreen可使用更高浓度,无PCR抑制,对GC含量丰富和AT含量丰富的区域具有相同的结合能力,无明显的序列偏向性。这使得 EvaGreen非常适合对多种类型的PCR产物进行HRM分析,对更低的荧光差异产生不同的熔解曲线,确保获得标准化结果。

优化的HRM PCR Master Mix

HRM PCR Master Mix由HotStarTaq Plus DNA Polymerase和一种新型的HRM PCR缓冲液体系组成,能得到高度特异性的扩增和不同的熔解曲线,可用于难处理得基因组位点,如Class IV SNPs(参见Successful genotyping of an A/T Class IV SNP)。确保目的PCR产物的特异性扩增;减少非特异性产物和引物二聚体的形成,如果没有去除(参见Successful typing of gene mutations)。

新型的缓冲液(包含在预混液中)通过在每个PCR循环的退火步骤中提高特异性引物的结合比率来维持每个PCR循环的特异性扩增。KCl 和 (NH4)2SO4独特的平衡组合,使得该缓冲液在很宽的退火温度范围和Mg2+浓度范围内提供严格的引物退火条件。无需通过改变退火温度和Mg2+浓度来优化PCR反应。

适合难处理的突变位点

Type-it HRM PCR Kit是一种简单检测难处理突变位点的有力体系(参见Highly specific and successful amplification of difficult genomic loci)。 位于GC含量高或高级二级结构区域的突变或SNPs都难以扩增,用于常规的HRM PCR方法。2x HRM PCR Master Mix包含新型的PCR添加剂Q-Solution,使用特定浓度的Q-Solution可帮助克服这些困难。Q-Solution通过修饰DNA的熔解 行为,可成功扩增难处理的目标序列,无需优化。

Type-it HRM PCR Kit的特点
组成 优点
2x HRM PCR Master Mix 建立新的检测无需优化 
专门用于突变和SNPs的HRM分析
专门用于适合HRM分析的所有循环仪
方便的反应体系构建,减少移液误差
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 高度特异性扩增
室温下快速、简单的构建反应体系
Type-it HRM PCR Buffer 不同的熔解曲线
提高扩增特异性
Q-Solution 提高对难处理模板的扩增能力
EvaGreen Dye 新型的饱和dsDNA结合染料
不同的熔解曲线分析

操作流程

Type-it HRM PCR Kit包括专门的、应用特异性的操作流程,预优化后用于多种real-time循环仪,如Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪、Rotor-Gene 6000和LightCycler 480。此外,采用试剂盒提供的优化操作流程还可使用Applied Biosystems 7500 Fast System和Applied Biosystems 7900。我们的网站上提供详细的操作流程。

快速循环步骤,易构建的HRM检测,可直接获得结果

Type-it HRM PCR Buffer的独有特色和试剂盒提供的优化操作流程,确保一次获得成功的HRM基因分型结果。无需冗长的反应参数优化,新的HRM基因分型检测可快速、简单地标准化,并用于常规研究(参见Successful HRM analysis without the need for optimization)。此外,Type-it HRM PCR Kit的快速循环操作流程通过缩短PCR的运行时间提高通量,可更快获得准确的结果。

方便的试剂盒规格

该试剂盒采用即用型、预优化预混液的规格,更加方便。使用预混液可节约时间,简化反应体系构建的手工操作,通过排除移液误差和污染的可能来 源提高可重复性,尽量减少移液步骤,无需繁琐的计算。使用预混液可进行室温下的反应体系构建,快速、简单。预混液中含有的HotStarTaq Plus DNA Polymerase在95°C,5-minute被激活,可在热循环程序中简单设置。

应用

Type-it HRM PCR Kit可用于多种应用,包括:

  • 检测插入、缺失和异位 
  • 扫描基因突变
  • SNP基因分型
  • 检测和区分微生物突变体

Type-it HRM PCR Kit是多种研究领域的通用工具,包括:

  • 疾病和癌症基因位点的分型
  • 生物标记物的发现
  • 疾病相关研究
  • 转基因植物或动物的分型
  • 病原体检测和基因分型

Bcl-2 Antibody (BH3 Domain Specific) 货号:AP1303a

Bcl-2 Antibody (BH3 Domain Specific) 货号:AP1303a

Bcl-2 Antibody (BH3 Domain Specific)

货  号:AP1303a

产品规格:100UL

原  产  地:USA

参考价格:1100 (参考价格,以实际价格为准)

优惠价格:

产品详细信息

Bcl-2 Antibody (BH3 Domain Specific) – Product info

Application IHC, IF, WB
Primary Accession P10415
Other Accession O02718
Reactivity Human
Predicted Bovine
Isotype Rabbit Ig
Calculated MW 26266 Da

Bcl-2 Antibody (BH3 Domain Specific) – Additional info

Gene ID 596
Other Names
BCL2; Apoptosis regulator Bcl-2
Target/Specificity
This Bcl antibody is generated from rabbits immunized with a KLH conjugated synthetic peptide between 75-110 amino acids from human Bcl.
Dilution
IHC~~1:10~50
IF~~1:10~50
WB~~1:1000

产品详细信息

Bcl-2 Antibody (BH3 Domain Specific) – Product info

Application IHC, IF, WB
Primary Accession P10415
Other Accession O02718
Reactivity Human
Predicted Bovine
Isotype Rabbit Ig
Calculated MW 26266 Da

Bcl-2 Antibody (BH3 Domain Specific) – Additional info

Gene ID 596
Other Names
BCL2; Apoptosis regulator Bcl-2
Target/Specificity
This Bcl antibody is generated from rabbits immunized with a KLH conjugated synthetic peptide between 75-110 amino acids from human Bcl.
Dilution
IHC~~1:10~50
IF~~1:10~50
WB~~1:1000

QIAGEN LongRange PCR Kit (20) 货号:206401

QIAGEN LongRange PCR Kit (20) 货号:206401

QIAGEN LongRange PCR Kit (20)

货  号:206401

产品规格:20

原  产  地:德国

参考价格:757 (参考价格,以实际价格为准)

优惠价格:

产品详细信息

QIAGEN LongRange PCR Kit (20)

206401

用于高灵敏度、准确的长片段PCR扩增

  • 扩增得到长片段PCR产物(最长至40 kb DNA)
  • 高保真酶确保低错配率
  • 独特的缓冲液体系最大程度的减少PCR条件优化
  • 扩增低拷贝和高GC含量模板

QIAGEN LongRange PCR Kit提供专用的、高度可靠的解决方案,用于对基因组DNA和cDNA,甚至是低拷贝数模板,进行长片段扩增。新型的高保真酶可确保低错配率。该试剂盒包含核苷酸,高度适用于复杂的基因分型实验。

原理

QIAGEN LongRange PCR Kit将强大的聚合酶混合物与新型的专用于有效扩增长达40 kb靶的缓冲体系结合。该试剂盒也包含Q-Solution,一种PCR添加剂有助于扩增富含GC片段的模板和dNTP。

LongRange PCR Enzyme Mix

LongRange PCR Enzyme Mix是高纯度重组耐热DNA聚合酶和持续合成能力增强因子的混合物,克隆在E. coli内。这种独特的酶混合物确保了高延伸率和高保真率,能够成功扩增极长的片段。

优化的缓冲液体系,用于极长的PCR产物

扩增大于4 kb长的PCR产物通常失败,并通常需要优化长度的操作流程。失败的原因包括非特异性引物退火或欠佳的循环条件。避免DNA损伤,如DNA脱嘌呤,在扩增 长片段PCR产物尤为重要,因为模板中一个DNA损伤就足以影响聚合酶效率。PCR循环过程中的DNA损伤可使用特殊的缓冲液将其降到最低,用来稳定反应 中的pH值。QIAGEN LongRange PCR Buffer经优化用于扩增长达40 kb的PCR产物,并提供有效保护防止其脱嘌呤(参见Protection of DNA from excessive damage)。

扩增稀少和困难模板

独特的LongRange PCR Buffer优化了高温下(72–94°C)pH缓冲的性能、降低了pH导致的模板降解。与Q-Solution(已提供)相结合,能进一步优化富含GC片段和其他“困难”模板的扩增。

操作流程

QIAGEN LongRange PCR Kit包含预优化的实验方案,用于可靠的精确长片段PCR,片段长达40 kb。该试剂盒能成功运用于扩增长片段靶(所有靶都在0.1–10 kb范围内)、极长片段靶(基因组DNA >10 kb;游离态DNA 10–40 kb)、从逆转录反应获得的长cDNA模板和富含GC片段和其他“困难”模板。

应用

QIAGEN LongRange PCR确保对标准或复杂模板(甚至低丰度或富含GC 片段的模板)进行准确的长片段扩增,并高度适用于所有PCR应用,包括测序或定点重测序、拷贝数变异的验证(CNV)、染色体易位断点图谱和其他结构变异以及克隆。

产品详细信息

QIAGEN LongRange PCR Kit (20)

206401

用于高灵敏度、准确的长片段PCR扩增

  • 扩增得到长片段PCR产物(最长至40 kb DNA)
  • 高保真酶确保低错配率
  • 独特的缓冲液体系最大程度的减少PCR条件优化
  • 扩增低拷贝和高GC含量模板

QIAGEN LongRange PCR Kit提供专用的、高度可靠的解决方案,用于对基因组DNA和cDNA,甚至是低拷贝数模板,进行长片段扩增。新型的高保真酶可确保低错配率。该试剂盒包含核苷酸,高度适用于复杂的基因分型实验。

原理

QIAGEN LongRange PCR Kit将强大的聚合酶混合物与新型的专用于有效扩增长达40 kb靶的缓冲体系结合。该试剂盒也包含Q-Solution,一种PCR添加剂有助于扩增富含GC片段的模板和dNTP。

LongRange PCR Enzyme Mix

LongRange PCR Enzyme Mix是高纯度重组耐热DNA聚合酶和持续合成能力增强因子的混合物,克隆在E. coli内。这种独特的酶混合物确保了高延伸率和高保真率,能够成功扩增极长的片段。

优化的缓冲液体系,用于极长的PCR产物

扩增大于4 kb长的PCR产物通常失败,并通常需要优化长度的操作流程。失败的原因包括非特异性引物退火或欠佳的循环条件。避免DNA损伤,如DNA脱嘌呤,在扩增 长片段PCR产物尤为重要,因为模板中一个DNA损伤就足以影响聚合酶效率。PCR循环过程中的DNA损伤可使用特殊的缓冲液将其降到最低,用来稳定反应 中的pH值。QIAGEN LongRange PCR Buffer经优化用于扩增长达40 kb的PCR产物,并提供有效保护防止其脱嘌呤(参见Protection of DNA from excessive damage)。

扩增稀少和困难模板

独特的LongRange PCR Buffer优化了高温下(72–94°C)pH缓冲的性能、降低了pH导致的模板降解。与Q-Solution(已提供)相结合,能进一步优化富含GC片段和其他“困难”模板的扩增。

操作流程

QIAGEN LongRange PCR Kit包含预优化的实验方案,用于可靠的精确长片段PCR,片段长达40 kb。该试剂盒能成功运用于扩增长片段靶(所有靶都在0.1–10 kb范围内)、极长片段靶(基因组DNA >10 kb;游离态DNA 10–40 kb)、从逆转录反应获得的长cDNA模板和富含GC片段和其他“困难”模板。

应用

QIAGEN LongRange PCR确保对标准或复杂模板(甚至低丰度或富含GC 片段的模板)进行准确的长片段扩增,并高度适用于所有PCR应用,包括测序或定点重测序、拷贝数变异的验证(CNV)、染色体易位断点图谱和其他结构变异以及克隆。

CGB/HCG-Beta Antibody (C-term) 货号:AP13036b

CGB/HCG-Beta Antibody (C-term) 货号:AP13036b

CGB/HCG-Beta Antibody (C-term)

货  号:AP13036b

产品规格:100UL

原  产  地:USA

参考价格:1100 (参考价格,以实际价格为准)

优惠价格:

产品详细信息

CGB/HCG-Beta Antibody (C-term) – Product info

Application WB, IHC
Primary Accession P01233
Other Accession Q6NT52, NP_149133.1
Reactivity Human
Isotype Rabbit Ig
Calculated MW 17739 Da

CGB/HCG-Beta Antibody (C-term) – Additional info

Gene ID 94115
Other Names
CGB; CGB3; Choriogonadotropin subunit beta; Chorionic gonadotrophin chain beta
Target/Specificity
This CGB/HCG-Beta antibody is generated from rabbits immunized with a KLH conjugated synthetic peptide between 137-165 amino acids from the C-terminal region of human CGB/HCG-Beta.
Dilution
WB~~1:1000
IHC~~1:10~50

产品详细信息

CGB/HCG-Beta Antibody (C-term) – Product info

Application WB, IHC
Primary Accession P01233
Other Accession Q6NT52, NP_149133.1
Reactivity Human
Isotype Rabbit Ig
Calculated MW 17739 Da

CGB/HCG-Beta Antibody (C-term) – Additional info

Gene ID 94115
Other Names
CGB; CGB3; Choriogonadotropin subunit beta; Chorionic gonadotrophin chain beta
Target/Specificity
This CGB/HCG-Beta antibody is generated from rabbits immunized with a KLH conjugated synthetic peptide between 137-165 amino acids from the C-terminal region of human CGB/HCG-Beta.
Dilution
WB~~1:1000
IHC~~1:10~50

REPLI-g Mini Kit (25) 货号:150023

REPLI-g Mini Kit (25) 货号:150023

REPLI-g Mini Kit (25)

货  号:150023

产品规格:25T

原  产  地:德国

参考价格:2820 (参考价格,以实际价格为准)

优惠价格:

产品详细信息

REPLI-g Mini Kit (25)

150023

对微量或者珍贵样本进行高度均一的全基因组扩增

  • 扩增获得10 µg DNA,产量稳定
  • 同时扩增多个基因组位点
  • 使用多重置换扩增反应获得可靠结果
  • 扩增获得的DNA适用于多种下游应用
  • 长期储存不会导致DNA降解

REPLI-g Mini Kit提供优化的试剂,利用多重置换扩增(MDA)技术,对微量或珍贵样本进行高度均一的全基因组扩增(WGA)。50 μl反应体积的常规DNA产量为10 μg,产物的平均长度长于10 kb(在2 kb至100 kb之间)。独特的REPLI-g技术能够从多种类型的微量或珍贵样本中高度均一的进行全基因组扩增,起始样本包括纯化后基因组DNA、新鲜血液或或干 血、口腔拭子、新鲜或冷冻组织或细胞。该方法可便利、准确的扩增基因组DNA,得到的DNA可即用于无需标记的多种下游应用,无需进行纯化或定量检测。与 基于PCR的全基因组扩增技术相比,这种方法的无错配率提高了1000倍,避免出现假阴性或假阳性结果。

原理

独特的REPLI-g技术使用创新的高保真酶Phi29聚合酶,利用多重置换扩增(MDA)技术扩增复杂的基因组DNA,并结合温和的碱变性, 均一的扩增基因组位点。REPLI-g Mini Kit的常规产量为10 µg,如需更多产量,可使用REPLI-g Midi Kit;因为这两个试剂盒的实验方案相同,反应体积也相同。反应体系构建十分简便,仅需约15分钟的手动操作时间,因此REPLI-g技术使用简便、可 靠,适用于对少量或珍贵的样本进行完全、均一的扩增。

扩增原理

REPLI-g利用等温基因组扩增,即多重置换扩增(MDA)技术:随机引物与变性DNA结合,在等温环境中,在Phi29聚合酶的作用下,进行置换合成反应。每个置换的单链作为模板,与引物结合,扩增生成高产量的DNA(参见Schematic representation of REPLI-g amplification)。Phi 29聚合酶为噬菌体衍生酶,具有3’→5’外切酶活性,准确性为Taq DNA聚合酶的1000倍。Phi29聚合酶与独特的REPLI-g缓冲液体系相配合,能够轻松的打开DNA的二级结构,如发卡结构,所以可确保在扩增过程中,聚合酶正常发挥作用。因此该技术生成的DNA片段长度可达100 kb,没有序列偏差(参见Unbiased amplification with Phi29 polymerase)。

DNA的碱变性

在酶扩增前,必须使基因组DNA变性,这通常是通过高温孵育、或在强碱性条件下进行的。REPLI-g Mini Kit采用温和的碱性环境孵育,使DNA变性,而片段化程度低,突变少。由此扩增获得的DNA十分完整,扩增的片段长,覆盖所有基因组位点和序列。使用 REPLI-g Mini Kit能够获得可靠的结果,确保在下游应用中不出现假阳性或假阴性结果。采用热变性的WGA技术会损伤模板DNA,导致扩增结果不准确(参见Effect of heat and alkaline denaturation on loci representation)。

操作流程

便利的单管操作

REPLI-g Mini Kit通过简便、高效的方法从纯化的少量基因组DNA样本或直接从全血、干血卡、白膜层、组织、培养的细胞中进行准确的全基因组扩增(参见REPLI-g Mini and Midi procedure)。加入裂解缓冲液使样本DNA裂解并变性,之后进行短暂孵育(参见REPLI-g Mini and Midi procedure)。中和后加入预混液(包括REPLI-g Mini DNA Polymerase),在30°C过夜进行等温扩增。REPLI-g扩增获得的DNA刻在–20°C长期储存(参见Consistent long-term stability)。

选择适合您实验需求的REPLI-g Kit(参见下表)。

表1. 种类丰富的REPLI-g Kits

REPLI-g Mini REPLI-g UltraFast Mini REPLI-g Midi REPLI-g Screening REPLI-g FFPE REPLI-g Mitochondrial DNA
起始样本 纯化后gDNA、血液、细胞 纯化后gDNA、血液、细胞 FFPE组织、FFPE组织中纯化得到的gDNA 纯化后gDNA
起始样本量 >10 ng gDNA, 0.5 µl blood or cells (>600 cells/µl) >10 ng gDNA, 0.5 µl blood or cells (>600 cells/µl) Section (1 cm diameter, 10-40 µm thick); >100 ng gDNA >1 ng纯化后gDNA
产量(µg/反应) 10 7–10 40 8 标准产量:≤10,高产量≤40 3–5
反应时间(小时) 10–16 1.5 8–16 12–16 标准产量:4,高产量:10 8
手动操作时间(分钟) 15 15 15 15 40 15
规格 反应管 反应管 反应管 孔板 反应管 反应管

应用

REPLI-g扩增得到的DNA可用于多种下游应用,包括:

  • 使用TagMan引物/探针对的SNP基因分型
  • 基于定量PCR或PCR的突变检测
  • 二代测序
  • STR/微卫星分析
  • Sanger测序
  • RFLP和Southern印迹分析
  • 芯片技术,如比较基因组杂交

产品详细信息

REPLI-g Mini Kit (25)

150023

对微量或者珍贵样本进行高度均一的全基因组扩增

  • 扩增获得10 µg DNA,产量稳定
  • 同时扩增多个基因组位点
  • 使用多重置换扩增反应获得可靠结果
  • 扩增获得的DNA适用于多种下游应用
  • 长期储存不会导致DNA降解

REPLI-g Mini Kit提供优化的试剂,利用多重置换扩增(MDA)技术,对微量或珍贵样本进行高度均一的全基因组扩增(WGA)。50 μl反应体积的常规DNA产量为10 μg,产物的平均长度长于10 kb(在2 kb至100 kb之间)。独特的REPLI-g技术能够从多种类型的微量或珍贵样本中高度均一的进行全基因组扩增,起始样本包括纯化后基因组DNA、新鲜血液或或干 血、口腔拭子、新鲜或冷冻组织或细胞。该方法可便利、准确的扩增基因组DNA,得到的DNA可即用于无需标记的多种下游应用,无需进行纯化或定量检测。与 基于PCR的全基因组扩增技术相比,这种方法的无错配率提高了1000倍,避免出现假阴性或假阳性结果。

原理

独特的REPLI-g技术使用创新的高保真酶Phi29聚合酶,利用多重置换扩增(MDA)技术扩增复杂的基因组DNA,并结合温和的碱变性, 均一的扩增基因组位点。REPLI-g Mini Kit的常规产量为10 µg,如需更多产量,可使用REPLI-g Midi Kit;因为这两个试剂盒的实验方案相同,反应体积也相同。反应体系构建十分简便,仅需约15分钟的手动操作时间,因此REPLI-g技术使用简便、可 靠,适用于对少量或珍贵的样本进行完全、均一的扩增。

扩增原理

REPLI-g利用等温基因组扩增,即多重置换扩增(MDA)技术:随机引物与变性DNA结合,在等温环境中,在Phi29聚合酶的作用下,进行置换合成反应。每个置换的单链作为模板,与引物结合,扩增生成高产量的DNA(参见Schematic representation of REPLI-g amplification)。Phi 29聚合酶为噬菌体衍生酶,具有3’→5’外切酶活性,准确性为Taq DNA聚合酶的1000倍。Phi29聚合酶与独特的REPLI-g缓冲液体系相配合,能够轻松的打开DNA的二级结构,如发卡结构,所以可确保在扩增过程中,聚合酶正常发挥作用。因此该技术生成的DNA片段长度可达100 kb,没有序列偏差(参见Unbiased amplification with Phi29 polymerase)。

DNA的碱变性

在酶扩增前,必须使基因组DNA变性,这通常是通过高温孵育、或在强碱性条件下进行的。REPLI-g Mini Kit采用温和的碱性环境孵育,使DNA变性,而片段化程度低,突变少。由此扩增获得的DNA十分完整,扩增的片段长,覆盖所有基因组位点和序列。使用 REPLI-g Mini Kit能够获得可靠的结果,确保在下游应用中不出现假阳性或假阴性结果。采用热变性的WGA技术会损伤模板DNA,导致扩增结果不准确(参见Effect of heat and alkaline denaturation on loci representation)。

操作流程

便利的单管操作

REPLI-g Mini Kit通过简便、高效的方法从纯化的少量基因组DNA样本或直接从全血、干血卡、白膜层、组织、培养的细胞中进行准确的全基因组扩增(参见REPLI-g Mini and Midi procedure)。加入裂解缓冲液使样本DNA裂解并变性,之后进行短暂孵育(参见REPLI-g Mini and Midi procedure)。中和后加入预混液(包括REPLI-g Mini DNA Polymerase),在30°C过夜进行等温扩增。REPLI-g扩增获得的DNA刻在–20°C长期储存(参见Consistent long-term stability)。

选择适合您实验需求的REPLI-g Kit(参见下表)。

表1. 种类丰富的REPLI-g Kits

REPLI-g Mini REPLI-g UltraFast Mini REPLI-g Midi REPLI-g Screening REPLI-g FFPE REPLI-g Mitochondrial DNA
起始样本 纯化后gDNA、血液、细胞 纯化后gDNA、血液、细胞 FFPE组织、FFPE组织中纯化得到的gDNA 纯化后gDNA
起始样本量 >10 ng gDNA, 0.5 µl blood or cells (>600 cells/µl) >10 ng gDNA, 0.5 µl blood or cells (>600 cells/µl) Section (1 cm diameter, 10-40 µm thick); >100 ng gDNA >1 ng纯化后gDNA
产量(µg/反应) 10 7–10 40 8 标准产量:≤10,高产量≤40 3–5
反应时间(小时) 10–16 1.5 8–16 12–16 标准产量:4,高产量:10 8
手动操作时间(分钟) 15 15 15 15 40 15
规格 反应管 反应管 反应管 孔板 反应管 反应管

应用

REPLI-g扩增得到的DNA可用于多种下游应用,包括:

  • 使用TagMan引物/探针对的SNP基因分型
  • 基于定量PCR或PCR的突变检测
  • 二代测序
  • STR/微卫星分析
  • Sanger测序
  • RFLP和Southern印迹分析
  • 芯片技术,如比较基因组杂交

TOR1B Antibody (C-term) 货号:AP13034b

TOR1B Antibody (C-term) 货号:AP13034b

TOR1B Antibody (C-term)

货  号:AP13034b

产品规格:100UL

原  产  地:USA

参考价格:1100 (参考价格,以实际价格为准)

优惠价格:

产品详细信息

TOR1B Antibody (C-term) – Product info

Application WB, IHC
Primary Accession O14657
Other Accession NP_055321.1
Reactivity Human
Isotype Rabbit Ig
Calculated MW 37979 Da

TOR1B Antibody (C-term) – Additional info

Gene ID 27348
Other Names
TOR1B; DQ1; Torsin-1B; Torsin family 1 member B
Target/Specificity
This TOR1B antibody is generated from rabbits immunized with a KLH conjugated synthetic peptide between 215-243 amino acids from the C-terminal region of human TOR1B.
Dilution
WB~~1:1000
IHC~~1:10~50

产品详细信息

TOR1B Antibody (C-term) – Product info

Application WB, IHC
Primary Accession O14657
Other Accession NP_055321.1
Reactivity Human
Isotype Rabbit Ig
Calculated MW 37979 Da

TOR1B Antibody (C-term) – Additional info

Gene ID 27348
Other Names
TOR1B; DQ1; Torsin-1B; Torsin family 1 member B
Target/Specificity
This TOR1B antibody is generated from rabbits immunized with a KLH conjugated synthetic peptide between 215-243 amino acids from the C-terminal region of human TOR1B.
Dilution
WB~~1:1000
IHC~~1:10~50

EpiTect HRM PCR Kit (100) 货号:59445

EpiTect HRM PCR Kit (100) 货号:59445

EpiTect HRM PCR Kit (100)

货  号:59445

产品规格:100

原  产  地:德国

参考价格:1350 (参考价格,以实际价格为准)

优惠价格:

产品详细信息

EpiTect HRM PCR Kit (100)

59445

应用HRM对甲基化状态的变化进行可靠的筛查

  • 准确检测CpG位点甲基化状态的变化
  • 高度特异性的PCR扩增,无需优化
  • EvaGreen荧光染料可明显区分熔解曲线
  • 方便的预混液形式,经优化的操作步骤
  • 快速方便地开发新的HRM甲基化分析方法
EpiTect HRM PCR Kit应用HRM技术,快速筛查和准确检测亚硫酸氢盐转化后的DNA CpG甲基化位点的状态变化。经优化的试剂盒以方便的预混液形式提供,包含新型的结合双链DNA的荧光染料EvaGreen,以及经优化的HRM缓冲液、 HotStarTaq Plus DNA Polymerase和dNTPs。该试剂盒与适合进行HRM分析的real-time仪器兼容,尤其是Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪,以及Rotor-Gene 6000和LightCycler 480。

原理

HRM是一种新型的技术,基于升温过程中双链DNA(dsDNA)转变为单链DNA(ssDNA)时的熔解行为,用于双链PCR产物。使用转化特异性而非甲基化特异性的引物扩增亚硫酸氢盐转化的DNA。因此,该引物需含有几个转化的胞嘧啶,并且在CpG位点的旁边(参见Principle of methylation analysis of the APC promoter by HRM)。这是为了确保只扩增亚硫酸氢盐转化的DNA和在HRM分析时区分甲基化和非甲基化CpG位点。

EvaGreen荧光可连续检测,随着温度的升高信号减弱。只有结合dsDNA后,EvaGreen才能被检测到。这样在HRM分析刚开始时有很强 的荧光。随着温度升高DNA熔解增加,EvaGreen被释放,荧光信号减弱到背景水平。富含GC的DNA更稳定,因此与富含AT的区域相比熔解更加缓 慢,在温度时维持双链的时间更长(参见Principle of HRM technology)。

HRM是进行基于探针的甲基化分析的方便、经济选择。PCR产物可通过序列、长度、GC含量或链补充,甚至单个碱基对的改变进行区分。

方便的预混液形式

EpiTect HRM PCR Kit提供方便的预混液形式,提高其易用性。经优化的2x EpiTect HRM PCR Master Mix确保高度特异性扩增。此外,该试剂盒能够通过HRM灵活、快速和灵敏的分析亚硫酸氢盐转化DNA中CpG二核苷酸的甲基化状态。该预混液包括浓度处 于最佳状态的HotStarTaq Plus DNA Polymerase、EpiTect HRM PCR Buffer、dNTPs和EvaGreen荧光染料。

HotStarTaq Plus DNA Polymerase

HotStarTaq Plus DNA Polymerase,一种经修饰的QIAGEN Taq DNA Polymerase,以非活性形式状态提供,在室温下无聚合酶活性。这就避免了在PCR设置和PCR循环起始时低温状态下非特异性退火引物的延长和引物二聚体的形成。

优化的EpiTect HRM PCR Buffer

EpiTect HRM PCR Buffer可在任何PCR循环中进行特异性扩增。缓冲液中平衡的KCl和(NH4)2SO4组合促进特异性引物模板退火。同时,非特异性退火减少,获得最大产量的可进行HRM分析的特异性PCR产物。可持续特异性扩增获得高产量DNA,无需费时优化Mg2+的浓度。

操作流程

dsDNA与荧光染料EvaGreen结合,PCR扩增目标序列获得高拷贝片段。该染料不与ssDNA结合,只与dsDNA结合,结合后显荧光。然后进行扩增,EvaGreen荧光可连续检测,随着温度的升高信号减弱。

应用

EpiTect HRM PCR Kit使用HRM技术,提供高度可靠、经济的方法进行甲基化分析,可成功用于表观遗传学研究的甲基化分析。经优化的实验方案能够快速、高效的检测CpG位点的甲基化状态。该试剂盒简化了甲基化分析的研发。

产品详细信息

EpiTect HRM PCR Kit (100)

59445

应用HRM对甲基化状态的变化进行可靠的筛查

  • 准确检测CpG位点甲基化状态的变化
  • 高度特异性的PCR扩增,无需优化
  • EvaGreen荧光染料可明显区分熔解曲线
  • 方便的预混液形式,经优化的操作步骤
  • 快速方便地开发新的HRM甲基化分析方法
EpiTect HRM PCR Kit应用HRM技术,快速筛查和准确检测亚硫酸氢盐转化后的DNA CpG甲基化位点的状态变化。经优化的试剂盒以方便的预混液形式提供,包含新型的结合双链DNA的荧光染料EvaGreen,以及经优化的HRM缓冲液、 HotStarTaq Plus DNA Polymerase和dNTPs。该试剂盒与适合进行HRM分析的real-time仪器兼容,尤其是Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪,以及Rotor-Gene 6000和LightCycler 480。

原理

HRM是一种新型的技术,基于升温过程中双链DNA(dsDNA)转变为单链DNA(ssDNA)时的熔解行为,用于双链PCR产物。使用转化特异性而非甲基化特异性的引物扩增亚硫酸氢盐转化的DNA。因此,该引物需含有几个转化的胞嘧啶,并且在CpG位点的旁边(参见Principle of methylation analysis of the APC promoter by HRM)。这是为了确保只扩增亚硫酸氢盐转化的DNA和在HRM分析时区分甲基化和非甲基化CpG位点。

EvaGreen荧光可连续检测,随着温度的升高信号减弱。只有结合dsDNA后,EvaGreen才能被检测到。这样在HRM分析刚开始时有很强 的荧光。随着温度升高DNA熔解增加,EvaGreen被释放,荧光信号减弱到背景水平。富含GC的DNA更稳定,因此与富含AT的区域相比熔解更加缓 慢,在温度时维持双链的时间更长(参见Principle of HRM technology)。

HRM是进行基于探针的甲基化分析的方便、经济选择。PCR产物可通过序列、长度、GC含量或链补充,甚至单个碱基对的改变进行区分。

方便的预混液形式

EpiTect HRM PCR Kit提供方便的预混液形式,提高其易用性。经优化的2x EpiTect HRM PCR Master Mix确保高度特异性扩增。此外,该试剂盒能够通过HRM灵活、快速和灵敏的分析亚硫酸氢盐转化DNA中CpG二核苷酸的甲基化状态。该预混液包括浓度处 于最佳状态的HotStarTaq Plus DNA Polymerase、EpiTect HRM PCR Buffer、dNTPs和EvaGreen荧光染料。

HotStarTaq Plus DNA Polymerase

HotStarTaq Plus DNA Polymerase,一种经修饰的QIAGEN Taq DNA Polymerase,以非活性形式状态提供,在室温下无聚合酶活性。这就避免了在PCR设置和PCR循环起始时低温状态下非特异性退火引物的延长和引物二聚体的形成。

优化的EpiTect HRM PCR Buffer

EpiTect HRM PCR Buffer可在任何PCR循环中进行特异性扩增。缓冲液中平衡的KCl和(NH4)2SO4组合促进特异性引物模板退火。同时,非特异性退火减少,获得最大产量的可进行HRM分析的特异性PCR产物。可持续特异性扩增获得高产量DNA,无需费时优化Mg2+的浓度。

操作流程

dsDNA与荧光染料EvaGreen结合,PCR扩增目标序列获得高拷贝片段。该染料不与ssDNA结合,只与dsDNA结合,结合后显荧光。然后进行扩增,EvaGreen荧光可连续检测,随着温度的升高信号减弱。

应用

EpiTect HRM PCR Kit使用HRM技术,提供高度可靠、经济的方法进行甲基化分析,可成功用于表观遗传学研究的甲基化分析。经优化的实验方案能够快速、高效的检测CpG位点的甲基化状态。该试剂盒简化了甲基化分析的研发。

mouse BID Antibody (S61) 货号:AP1307d

mouse BID Antibody (S61) 货号:AP1307d

mouse BID Antibody (S61)

货  号:AP1307d

产品规格:100UL

原  产  地:USA

参考价格:1100 (参考价格,以实际价格为准)

优惠价格:

产品详细信息

mouse BID Antibody (S61) – Product info

Application WB, IHC, FC
Primary Accession P70444
Other Accession NP_031570
Reactivity Mouse
Isotype Rabbit Ig
Calculated MW 21952 Da

mouse BID Antibody (S61) – Additional info

Gene ID 12122
Other Names
Bid; BH3-interacting domain death agonist; p22 BID; BH3-interacting domain death agonist p15; p15 BID; BH3-interacting domain death agonist p13; p13 BID; BH3-interacting domain death agonist p11; p11 BID
Target/Specificity
This mouse BID antibody is generated from rabbits immunized with a KLH conjugated synthetic peptide between 39-68 amino acids from mouse BID.
Dilution
WB~~1:1000
IHC~~1:50~100
FC~~1:10~50

产品详细信息

mouse BID Antibody (S61) – Product info

Application WB, IHC, FC
Primary Accession P70444
Other Accession NP_031570
Reactivity Mouse
Isotype Rabbit Ig
Calculated MW 21952 Da

mouse BID Antibody (S61) – Additional info

Gene ID 12122
Other Names
Bid; BH3-interacting domain death agonist; p22 BID; BH3-interacting domain death agonist p15; p15 BID; BH3-interacting domain death agonist p13; p13 BID; BH3-interacting domain death agonist p11; p11 BID
Target/Specificity
This mouse BID antibody is generated from rabbits immunized with a KLH conjugated synthetic peptide between 39-68 amino acids from mouse BID.
Dilution
WB~~1:1000
IHC~~1:50~100
FC~~1:10~50

REPLI-g Midi Kit (25) 货号:150043

REPLI-g Midi Kit (25) 货号:150043

REPLI-g Midi Kit (25)

货  号:150043

产品规格:25T

原  产  地:德国

参考价格:7530 (参考价格,以实际价格为准)

优惠价格:

产品详细信息

REPLI-g Midi Kit (25)

150043

对微量或者珍贵样本进行高度均一的全基因组扩增

  • 扩增获得40 µg DNA,产量稳定
  • 同时扩增多个基因组位点
  • 使用多重置换扩增反应获得可靠结果
  • 扩增获得的DNA适用于多种下游应用
  • 长期储存不会导致DNA降解

REPLI-g Midi Kit提供优化的试剂,利用多重置换扩增(MDA)技术,对微量或珍贵样本进行高度均一的全基因组扩增(WGA)。50 μl反应体积的常规DNA产量为40 μg,产物的平均长度长于10 kb(在2 kb至100 kb之间)。独特的REPLI-g技术能够从多种类型的微量或珍贵样本中高度均一的进行全基因组扩增,起始样本包括纯化后基因组DNA、新鲜血液或或干 血、口腔拭子、新鲜或冷冻组织或细胞。该方法可便利、准确的扩增基因组DNA,得到的DNA可即用于无需标记的多种下游应用,无需进行纯化或定量检测。与 基于PCR的全基因组扩增技术相比,这种方法的无错配率提高了1000倍,避免出现假阴性或假阳性结果。

原理

独特的REPLI-g技术使用创新的高保真酶Phi29聚合酶,利用多重置换扩增(MDA)技术扩增复杂的基因组DNA, 并结合温和的碱变性,均一的扩增基因组位点。REPLI-g Mini Kit的常规产量为10 µg,如需更多产量,可使用REPLI-g Midi Kit;因为这两个试剂盒的实验方案相同,反应体积也相同。反应体系构建十分简便,仅需约15分钟的手动操作时间,因此REPLI-g技术使用简便、可 靠,适用于对少量或珍贵的样本进行完全、均一的扩增。

扩增原理

REPLI-g利用等温基因组扩增,即多重置换扩增(MDA)技术:随机引物与变性DNA结合,在等温环境中,在Phi29聚合酶的作用下,进行置换合成反应。每个置换的单链作为模板,与引物结合,扩增生成高产量的DNA(参见Schematic representation of REPLI-g amplification)。Phi 29聚合酶为噬菌体衍生酶,具有3’→5’外切酶活性,准确性为Taq DNA聚合酶的1000倍。Phi29聚合酶与独特的REPLI-g缓冲液体系相配合,能够轻松的打开DNA的二级结构,如发卡结构,所以可确保在扩增过程中,聚合酶正常发挥作用。因此该技术生成的DNA片段长度可达100 kb,没有序列偏差(参见Unbiased amplification with Phi29 polymerase)。

DNA的碱变性

在酶扩增前,必须使基因组DNA变性,这通常是通过高温孵育、或在强碱性条件下进行的。REPLI-g Midi Kit采用温和的碱性环境孵育,使DNA变性,而片段化程度低,突变少。由此扩增获得的DNA十分完整,扩增的片段长,覆盖所有基因组位点和序列。使用 REPLI-g Midi Kit能够获得可靠的结果,确保在下游应用中不出现假阳性或假阴性结果。采用热变性的WGA技术会损伤模板DNA,导致扩增结果不准确(参见Effect of heat and alkaline denaturation on loci representation)。

操作流程

便利的单管操作

REPLI-g Midi Kit通过简便、高效的方法从纯化的少量基因组DNA样本或直接从全血、干血卡、白膜层、组织、培养的细胞中进行准确的全基因组扩增(参见REPLI-g Mini and Midi procedure)。加入裂解缓冲液使样本DNA裂解并变性,之后进行短暂孵育(参见REPLI-g Mini and Midi procedure)。中和后加入预混液(包括REPLI-g Mini DNA Polymerase),在30°C过夜进行等温扩增。REPLI-g扩增获得的DNA刻在–20°C长期储存(参见Consistent long-term stability)。

选择适合您实验需求的REPLI-g Kit(参见下表)。

表1. 种类丰富的REPLI-g Kits

REPLI-g Mini REPLI-g UltraFast Mini REPLI-g Midi REPLI-g Screening REPLI-g FFPE REPLI-g Mitochondrial DNA
起始样本 纯化后gDNA、血液、细胞 纯化后gDNA、血液、细胞 FFPE组织、FFPE组织中纯化得到的gDNA 纯化后gDNA
起始样本量 >10 ng gDNA, 0.5 µl blood or cells (>600 cells/µl) >10 ng gDNA, 0.5 µl blood or cells (>600 cells/µl) Section (1 cm diameter, 10-40 µm thick); >100 ng gDNA >1 ng纯化后gDNA
产量(µg/反应) 10 7–10 40 8 标准产量:≤10,高产量≤40 3–5
反应时间(小时) 10–16 1.5 8–16 12–16 标准产量:4,高产量:10 8
手动操作时间(分钟) 15 15 15 15 40 15
规格 反应管 反应管 反应管 孔板 反应管 反应管

应用

REPLI-g扩增得到的DNA可用于多种下游应用,包括:

  • 使用TagMan引物/探针对的SNP基因分型
  • 基于定量PCR或PCR的突变检测
  • 二代测序
  • STR/微卫星分析
  • Sanger测序
  • RFLP和Southern印迹分析
  • 芯片技术,如比较基因组杂交

产品详细信息

REPLI-g Midi Kit (25)

150043

对微量或者珍贵样本进行高度均一的全基因组扩增

  • 扩增获得40 µg DNA,产量稳定
  • 同时扩增多个基因组位点
  • 使用多重置换扩增反应获得可靠结果
  • 扩增获得的DNA适用于多种下游应用
  • 长期储存不会导致DNA降解

REPLI-g Midi Kit提供优化的试剂,利用多重置换扩增(MDA)技术,对微量或珍贵样本进行高度均一的全基因组扩增(WGA)。50 μl反应体积的常规DNA产量为40 μg,产物的平均长度长于10 kb(在2 kb至100 kb之间)。独特的REPLI-g技术能够从多种类型的微量或珍贵样本中高度均一的进行全基因组扩增,起始样本包括纯化后基因组DNA、新鲜血液或或干 血、口腔拭子、新鲜或冷冻组织或细胞。该方法可便利、准确的扩增基因组DNA,得到的DNA可即用于无需标记的多种下游应用,无需进行纯化或定量检测。与 基于PCR的全基因组扩增技术相比,这种方法的无错配率提高了1000倍,避免出现假阴性或假阳性结果。

原理

独特的REPLI-g技术使用创新的高保真酶Phi29聚合酶,利用多重置换扩增(MDA)技术扩增复杂的基因组DNA, 并结合温和的碱变性,均一的扩增基因组位点。REPLI-g Mini Kit的常规产量为10 µg,如需更多产量,可使用REPLI-g Midi Kit;因为这两个试剂盒的实验方案相同,反应体积也相同。反应体系构建十分简便,仅需约15分钟的手动操作时间,因此REPLI-g技术使用简便、可 靠,适用于对少量或珍贵的样本进行完全、均一的扩增。

扩增原理

REPLI-g利用等温基因组扩增,即多重置换扩增(MDA)技术:随机引物与变性DNA结合,在等温环境中,在Phi29聚合酶的作用下,进行置换合成反应。每个置换的单链作为模板,与引物结合,扩增生成高产量的DNA(参见Schematic representation of REPLI-g amplification)。Phi 29聚合酶为噬菌体衍生酶,具有3’→5’外切酶活性,准确性为Taq DNA聚合酶的1000倍。Phi29聚合酶与独特的REPLI-g缓冲液体系相配合,能够轻松的打开DNA的二级结构,如发卡结构,所以可确保在扩增过程中,聚合酶正常发挥作用。因此该技术生成的DNA片段长度可达100 kb,没有序列偏差(参见Unbiased amplification with Phi29 polymerase)。

DNA的碱变性

在酶扩增前,必须使基因组DNA变性,这通常是通过高温孵育、或在强碱性条件下进行的。REPLI-g Midi Kit采用温和的碱性环境孵育,使DNA变性,而片段化程度低,突变少。由此扩增获得的DNA十分完整,扩增的片段长,覆盖所有基因组位点和序列。使用 REPLI-g Midi Kit能够获得可靠的结果,确保在下游应用中不出现假阳性或假阴性结果。采用热变性的WGA技术会损伤模板DNA,导致扩增结果不准确(参见Effect of heat and alkaline denaturation on loci representation)。

操作流程

便利的单管操作

REPLI-g Midi Kit通过简便、高效的方法从纯化的少量基因组DNA样本或直接从全血、干血卡、白膜层、组织、培养的细胞中进行准确的全基因组扩增(参见REPLI-g Mini and Midi procedure)。加入裂解缓冲液使样本DNA裂解并变性,之后进行短暂孵育(参见REPLI-g Mini and Midi procedure)。中和后加入预混液(包括REPLI-g Mini DNA Polymerase),在30°C过夜进行等温扩增。REPLI-g扩增获得的DNA刻在–20°C长期储存(参见Consistent long-term stability)。

选择适合您实验需求的REPLI-g Kit(参见下表)。

表1. 种类丰富的REPLI-g Kits

REPLI-g Mini REPLI-g UltraFast Mini REPLI-g Midi REPLI-g Screening REPLI-g FFPE REPLI-g Mitochondrial DNA
起始样本 纯化后gDNA、血液、细胞 纯化后gDNA、血液、细胞 FFPE组织、FFPE组织中纯化得到的gDNA 纯化后gDNA
起始样本量 >10 ng gDNA, 0.5 µl blood or cells (>600 cells/µl) >10 ng gDNA, 0.5 µl blood or cells (>600 cells/µl) Section (1 cm diameter, 10-40 µm thick); >100 ng gDNA >1 ng纯化后gDNA
产量(µg/反应) 10 7–10 40 8 标准产量:≤10,高产量≤40 3–5
反应时间(小时) 10–16 1.5 8–16 12–16 标准产量:4,高产量:10 8
手动操作时间(分钟) 15 15 15 15 40 15
规格 反应管 反应管 反应管 孔板 反应管 反应管

应用

REPLI-g扩增得到的DNA可用于多种下游应用,包括:

  • 使用TagMan引物/探针对的SNP基因分型
  • 基于定量PCR或PCR的突变检测
  • 二代测序
  • STR/微卫星分析
  • Sanger测序
  • RFLP和Southern印迹分析
  • 芯片技术,如比较基因组杂交